Koje su posebne strukturne komponente fluorescentnog mikroskopa?
Blok filtera u boji je važan dio fluorescentnog mikroskopa, a njegove osnovne komponente se sastoje od prvog filtera barijere za ekscitacijsko svjetlo, drugog filtera barijere za emisiono svjetlo i ogledala za cijepanje zraka. Modeli filtera u boji i nazivi različitih proizvođača često su nedosljedni.
1. Filter pobuđene svjetlosti i emisioni svjetlosni filter: Na osnovu karakteristika izvora svjetlosti i fluorescentnog pigmenta, sljedeće tri vrste podudaranja se obično biraju kako bi se osiguralo ekscitacijsko svjetlo unutar određenog raspona talasnih dužina i omogućilo da fluorescencija koju pobuđuje uzorak prođe kroz okular radi snimanja.
UV ekscitacija: Filter pobuđenog svjetla može dopustiti UV svjetlosti da prođe i blokira prolazak vidljive svjetlosti iznad 400nm. Odgovarajući emisioni svjetlosni filter propušta plavo svjetlo, a svjetlo u vidnom polju izgleda plavo, kao kada se primjenjuje na DAPI bojenje.
Pobuđivanje plavog svjetla: Filter pobuđenog svjetla može dozvoliti prolazak plave svjetlosti i blokirati svjetlost drugih valnih dužina. Odgovarajući emisioni svjetlosni filter omogućava prolazak zelenog svjetla, kao što su markeri za bojenje GFP.
Pobuđivanje zelenog svjetla: Filter pobuđenog svjetla dozvoljava zelenom svjetlu da prođe i blokira svjetlost drugih valnih dužina. Odgovarajući emisioni svjetlosni filter obično propušta crveno svjetlo, kao što je bojenje rodaminom.
2. Poluprozirni i polureflektivni filter u boji: Njegova funkcija je da potpuno blokira ekscitacijsko svjetlo da prođe i reflektira ga; I emituju svetlost unutar odgovarajućeg opsega talasnih dužina. Njegov model odgovara filteru pobudnog svjetla i emisionom svjetlosnom filteru.
(2) Objektiv i okular
Mogu se primijeniti razna sočiva objektiva, ali je najbolje odabrati sočiva s dodatnom skalom i redukcijom hromatskih aberacija, jer je njihova samofluorescencija izuzetno niska, a njihov učinak prijenosa svjetlosti (opseg talasnih dužina) pogodan za fluorescenciju. Zbog činjenice da je fluorescentna svjetlina slike u polju mikroskopa direktno proporcionalna kvadratu omjera otvora objektiva i obrnuto proporcionalna njegovom uvećanju, da bi se poboljšala svjetlina fluorescentnih slika, potrebno je koristiti objektiv objektiva s većim omjerom otvora blende. Posebno za uzorke sa nedovoljnom fluorescencijom, potrebno je koristiti objektiv objektiva s velikim omjerom otvora blende i velikom propustljivošću svjetlosti, uz okular sa najmanjim mogućim uvećanjem.
(3) Ostali optički uređaji
Reflektivni sloj ogledala je obično presvučen aluminijumom jer aluminijum upija manje ultraljubičastog i vidljivog svetla u plavo ljubičastom području, reflektujući preko 90% (dok srebro ima reflektivnost od samo 70%). Uglavnom se koriste ravna ogledala. Fokusirajuća sočiva, posebno dizajnirana i proizvedena za fluorescentne mikroskope, izrađena su od kvarcnog stakla ili drugog stakla koje propušta ultraljubičasto svjetlo. Uređaj za padajuće svjetlo, osim što ima funkciju transmisivnog izvora svjetlosti, pogodniji je za direktno posmatranje neprozirnih i poluprozirnih uzoraka, kao što su debele ploče, filter membrane, kolonije bakterija, kulture tkiva i drugi uzorci. Posljednjih godina razvijeni su mnogi novi tipovi fluorescentnih mikroskopa pomoću uređaja za padajuće svjetlo, poznatog kao fluorescentni mikroskop padajućeg svjetla.
(4) Izvor svjetlosti
Danas se kao izvori svjetlosti najčešće koriste živine lampe visokog{0}}pritiska od 50 ili 100W. Tokom rada, između dvije elektrode dolazi do pražnjenja, što uzrokuje isparavanje žive i brzo povećanje pritiska unutar sfere (ovaj proces obično traje oko 5-15 minuta). Tokom ovog procesa emituju se svetlosni kvanti, a talasna dužina oslobođene svetlosti je dovoljna da pobuđuje različite fluorescentne supstance. Stoga se široko koristi u fluorescentnim mikroskopima.
Vek trajanja živinih lampi je relativno kratak, obično 200 sati. Kao odgovor na ovo ograničenje u vijeku trajanja, posljednjih godina, novi tip fluorescentnog izvora svjetlosti X-Cite je naširoko korišten sa super dugim vijekom trajanja sijalice od 2000 sati i fleksibilnom upotrebom - bez prethodnog zagrijavanja, spreman za upotrebu.
