Koje metode osvjetljenja su dostupne za mikroskope?
1. Trans-iluminacija
Biološki mikroskopi se uglavnom koriste za posmatranje prozirnih uzoraka i moraju biti osvijetljeni propuštenim svjetlom. Postoje dvije metode osvjetljenja
(1) Nakon što izvor svjetlosti kritičnog osvjetljenja prođe kroz kondenzator, on se snima na ravni objekta, kao što je prikazano na slici 5. Ako se zanemari gubitak svjetlosne energije, svjetlina slike izvora svjetlosti je ista kao i svjetlost sam izvor, tako da je ova metoda ekvivalentna postavljanju izvora svjetlosti na ravninu objekta. Očigledno, u kritičnom osvjetljenju, ako svjetlina površine izvora svjetlosti nije ujednačena, ili očigledno pokazuje male strukture, kao što su filamenti, itd., tada će učinak posmatranja mikroskopa biti ozbiljno pogođen, što je nedostatak kritično osvetljenje. Lijek je postavljanje mliječnobijelih filtera u boji i filtera u boji koji apsorbiraju toplinu ispred izvora svjetlosti kako bi se osvjetljenje učinilo ujednačenijim i izbjeglo oštećenje objekta koji se pregleda zbog dugotrajnog zračenja izvora svjetlosti. Pri osvjetljavanju propuštenom svjetlošću, kut otvora snopa slike objektiva određen je kutom otvora kvadratnog snopa kondenzatorskog ogledala. Da bi se u potpunosti iskoristio numerički otvor objektiva, kondenzatorsko sočivo bi trebalo da ima isti ili malo veći numerički otvor kao i sočivo objektiva.
(2) Kola rasvjeta Nedostatak neravnomjernog osvjetljenja na površini objekta kod kritičnog osvjetljenja može se eliminisati kod Kola rasvjete. Pomoćno kondenzatorsko sočivo 2 dodaje se između izvora svjetlosti 1 i kondenzatorskog sočiva 5, kao što je prikazano na Sl. 6 . Vidi se da je vidno polje (uzorak) sočiva objektiva ujednačeno osvijetljeno jer izvor svjetlosti nije direktno osvijetljen, ali je pomoćni kondenzator 2 (koji se naziva i Kolarovo ogledalo) ravnomjerno osvijetljen izvorom svjetlosti prikazan na primjerak 6.
2. epi-osvetljenje
Kada se posmatraju neprozirni objekti, kao što je posmatranje metalnih brusnih diskova kroz metalografski mikroskop, često se osvetljava sa strane ili odozgo. U ovom trenutku, na površini objekta koji se posmatra, nema pokrovnog stakla, a slika uzorka se stvara reflektovanom ili raspršenom svetlošću koja ulazi u sočivo objektiva. Kao što je prikazano na slici 7.
3. Metoda osvjetljenja za posmatranje čestica korištenjem tamnog polja
Ultramikroskopske čestice se mogu posmatrati metodom tamnog polja. Takozvane ultramikroskopske čestice odnose se na one sitne čestice koje su manje od granice rezolucije mikroskopa. Princip osvjetljenja tamnog polja je: ne dozvolite da svjetlost glavnog osvjetljenja uđe u sočivo objektiva, a samo svjetlost raspršena česticama može ući u sočivo objektiva radi snimanja.
Stoga se slika svijetlih čestica daje na tamnoj pozadini. Iako je pozadina vidnog polja tamna, kontrast (kontrast) je vrlo dobar, što može poboljšati rezoluciju.
Osvjetljenje tamnog polja može se podijeliti na jednosmjerno i dvosmjerno
(1) Jednosmjerno osvjetljenje tamnog polja Slika 8 je šematski dijagram jednosmjernog osvjetljenja tamnog polja. Sa slike se može vidjeti da nakon što se svjetlost koju emituje iluminator 2 reflektira od neprozirnog uzorka 1, glavna svjetlost ne ulazi u sočivo objektiva 3, a svjetlost koja ulazi u sočivo objektiva se uglavnom raspršuje česticama ili neravnomjerno detalji. Očigledno je da je ovo jednosmjerno osvjetljenje tamnog polja efikasno za uočavanje postojanja i kretanja čestica, ali nije efikasno za reprodukciju detalja objekata, odnosno postoji fenomen "izobličenja".
(2) Dvosmjerno osvjetljenje tamnog polja Dvosmjerno osvjetljenje tamnog polja može eliminirati defekt izobličenja uzrokovanu jednosmjernim. Ispred uobičajenog kondenzatora sa tri sočiva, postavite prstenastu dijafragmu, kao što je prikazano na slici 9, kako biste ostvarili dvosmjerno osvjetljenje tamnog polja. Tečnost je uronjena između poslednjeg komada kondenzatora i stakla objektiva, dok je prostor između pokrivnog stakla i sočiva objektiva suv. Zbog toga se snop u obliku prstena koji prolazi kroz kondenzator potpuno reflektuje u pokrivnom staklu i ne može ući u sočivo objektiva, formirajući petlju kao što je prikazano na slici. Samo svjetlost raspršena česticama na uzorku ulazi u sočivo objektiva, formirajući dvosmjerno osvjetljenje tamnog polja.
