Zašto nam je potreban konfokalni mikroskop?
1. Nakon napora i poboljšanja naših velikih prethodnika, optički mikroskop je dostigao savršen nivo. U stvari, obični mikroskopi nam mogu pružiti prekrasne mikroskopske slike jednostavno i brzo. Međutim, dogodio se događaj koji je donio revolucionarnu inovaciju u ovaj gotovo savršeni svijet mikroskopa, a to je izum "konfokalnog mikroskopa za lasersko skeniranje". Karakteristika ovog novog tipa mikroskopa je da usvaja optički sistem koji samo izdvaja informacije o slici sa površine na kojoj je koncentrisan fokus. Promjenom fokusa uz vraćanje dobivenih informacija u memoriju slike, može se dobiti živopisna slika s potpunom trodimenzionalnom informacijskom inteligencijom. Ovom metodom se lako mogu dobiti informacije o obliku površine koje se ne mogu potvrditi konvencionalnim mikroskopima. Pored toga, za tipične optičke mikroskope, "poboljšanje rezolucije" i "produbljivanje fokusne dubine" su kontradiktorni uslovi, posebno pri velikom uvećanju. Međutim, u konfokalnim mikroskopima ovaj se problem lako rješava.
2. Prednosti konfokalnih optičkih sistema
Šematski dijagram laserskog konfokalnog mikroskopa
Konfokalni optički sistem se koristi za osvetljavanje uzorka tačkama, dok reflektovanu svetlost prima i tačkasti senzor. Kada se uzorak postavi u žarišnu tačku, skoro sva reflektovana svjetlost može doći do fotoosjetljivog uređaja. Kada uzorak odstupi od žarišne tačke, reflektovana svjetlost ne može doći do fotoosjetljivog uređaja. To znači da će u konfokalnom optičkom sistemu biti emitovane samo slike koje se poklapaju sa žarišnom tačkom, a svetlosna tačka i beskorisno rasejano svetlo će biti zaštićeni.
Zašto koristiti laser?
U konfokalnom optičkom sistemu, uzorak je osvijetljen, a reflektovanu svjetlost također prima senzor tačke. Stoga postaju neophodni tačkasti izvori svjetlosti. Laser je vrlo tačan izvor svjetlosti. U većini slučajeva, izvor svjetlosti konfokalnog mikroskopa je laserski izvor svjetlosti. Osim toga, monokromatizam, usmjerenost i odličan oblik snopa lasera također su važni razlozi za njihovu široku primjenu.
4. Posmatranje u realnom vremenu zasnovano na skeniranju velike brzine postaje moguće
Lasersko skeniranje koristi akustični optički deflektor (AO prime) u horizontalnom smjeru i Servo Galvano ogledalo u vertikalnom smjeru. Zbog odsustva mehaničkih vibracija u audio optičkoj jedinici, moguće je izvršiti skeniranje velikom brzinom i posmatranje u realnom vremenu na ekranu za praćenje. Priroda velike brzine ove vrste kamere je veoma važna stavka koja direktno utiče na brzinu fokusiranja i pronalaženja pozicije.
5. Odnos između fokusnog položaja i svjetline
U konfokalnom optičkom sistemu, svjetlina uzorka je visoka kada je pravilno postavljen u fokusnu poziciju, a njegova svjetlina naglo opada prije i poslije njega (puna linija na slici 4). Osjetljiva selektivnost ove fokalne ravni je upravo princip koji stoji iza određivanja smjera visine i proširenja fokalne dubine u konfokalnoj mikroskopiji. U poređenju s tim, tipični optički mikroskopi ne pokazuju značajne promjene svjetline prije i poslije fokusnog položaja (isprekidana linija na slici 4).
6. Visok kontrast i rezolucija
Obično se u optičkim mikroskopima javlja reflektovana svjetlost koja odstupa od žarišne točke
