Zašto trebate koristiti konfokalni mikroskop?
1. Optički mikroskopi su dostigli stanje savršenstva kroz napore i poboljšanja naših velikih prethodnika. U stvari, obični mikroskopi nam mogu pružiti prekrasne mikroskopske slike jednostavno i brzo. Međutim, dogodio se događaj koji je donio revolucionarnu inovaciju u ovaj gotovo savršen svijet mikroskopije. Ovo je bio pronalazak "konfokalnog mikroskopa za lasersko skeniranje". Karakteristika ovog novog tipa mikroskopa je da koristi optički sistem koji izdvaja informacije o slici samo na površini na kojoj je fokus fokusiran, a dobijene informacije vraća u memoriju slike uz promenu fokusa, čime se dobijaju potpune 3D informacije. Živa slika inteligencije. Ovom metodom se lako mogu dobiti informacije o obliku površine koje se ne mogu potvrditi normalnim mikroskopom. Osim toga, za obične optičke mikroskope, "povećanje rezolucije" i "produbljivanje dubine fokusa" su konfliktni uslovi, posebno pri velikim uvećanjima. Međutim, u konfokalnoj mikroskopiji ovaj se problem lako rješava.
2. Prednosti konfokalnog optičkog sistema
Konfokalni optički sistem vrši tačkasto osvetljenje uzorka, a reflektovana svetlost takođe koristi tačkasti receptor da primi svetlost. Kada se uzorak postavi na poziciju fokusa, gotovo sva reflektovana svjetlost može doći do fotoreceptora. Kada je uzorak van fokusa, reflektovana svjetlost ne može doći do fotoreceptora. Drugim riječima, u konfokalnom optičkom sistemu će biti prikazana samo slika koja se poklapa sa fokusom, a svjetlosne mrlje i beskorisno raspršeno svjetlo će biti zaštićeni.
3. Zašto koristiti laser?
U konfokalnom optičkom sistemu, uzorak se osvetljava u tački, a reflektovana svetlost se takođe prima pomoću tačkastog fotoreceptora. Stoga postaju neophodni tačkasti izvori svjetlosti. Laseri su vrlo tačkasti izvori svjetlosti. U većini slučajeva, izvor svjetlosti konfokalnih mikroskopa koristi laserske izvore svjetlosti. Osim toga, karakteristike lasera kao što su monokromatizam, usmjerenost i odličan oblik snopa također su važni razlozi za njegovo široko usvajanje.
4. Posmatranje u realnom vremenu zasnovano na skeniranju velike brzine postaje moguće
Za lasersko skeniranje koristi se akustični optički deflektor (AO element) u horizontalnom smjeru, a servo električno kontrolirano ogledalo za skeniranje zraka (Servo Galvano-ogledalo) se koristi u vertikalnom smjeru. Budući da akustično-optička jedinica za otklon nema mehaničke vibracije, može skenirati velikom brzinom, što omogućava posmatranje u realnom vremenu na ekranu za praćenje. Velika brzina ovakvog snimanja je veoma važna stavka koja direktno utiče na brzinu fokusiranja i pronalaženja pozicije.
5. Odnos između položaja fokusa i svjetline
U konfokalnom optičkom sistemu, svjetlina je maksimalna kada je uzorak pravilno postavljen na poziciju fokusa, a njegova svjetlina će se naglo smanjiti ispred i iza njega (puna linija na slici 4). Ova osjetljiva selektivnost fokalne ravni je također princip koji stoji iza određivanja smjera visine i širenja dubine fokusa konfokalnog mikroskopa. Nasuprot tome, normalni optički mikroskop nema očigledne promjene svjetline prije i poslije pozicije fokusa (isprekidana linija na slici 4).
6. Visok kontrast i visoka rezolucija
U običnim optičkim mikroskopima, reflektovana svjetlost iz dijela izvan fokusa će interferirati i preklapati se s dijelom za snimanje fokusa, što će rezultirati smanjenjem kontrasta slike. Nasuprot tome, u konfokalnom optičkom sistemu, zalutala svjetlost izvan fokusa i zalutala svjetlost unutar sočiva objektiva su skoro potpuno uklonjene, tako da se može dobiti slika s vrlo visokim kontrastom. Osim toga, pošto svjetlost dvaput prolazi kroz sočivo objektiva, tačkasta slika se izoštrava, što također poboljšava moć razlučivanja mikroskopa.
