Zašto je uvećanje uljnog sočiva veće od povećanja običnog objektiva?
Razlozi zbog kojih se bakterije moraju popraviti prije bojenja u mikrobiološkim eksperimentima:
1: Ubija ćelije, lako se boji bojom.
2: Učinite da se bakterije zalijepe za stakalce i nije ih lako isprati vodom.
Prilikom fiksiranja treba ga polako sušiti. Ako zaista želite da ubrzate, možete ga osušiti nekoliko puta na udaljenosti iznad plamena alkoholne lampe. Ne dozvolite da se stakleni klizač zagrije, inače može uništiti životni oblik bakterija.
Bojenje po Gramu i mikroskopsko promatranje bakterija
1. Eksperimentalni princip
Princip bojenja po Gramu: Bakterije različito reagiraju na bojenje po Gramu zbog sastava i strukture njihovih ćelijskih zidova. Stanični zid gram-pozitivnih bakterija je uglavnom mrežasti čvor formiran od peptidoglikana. Kada se tretira etanolom, veličina pora mrežaste strukture postaje manja zbog dehidracije, a propusnost se smanjuje, tako da kompleks kristalno ljubičasto-jodnih tvari nije lako eluirati i zadržati u ćeliji, a plavičasto- ljubičasta boja primarnog sredstva za bojenje je i dalje zadržana nakon dekolorizacije i protivboje. Peptidoglikanski sloj ćelijskog zida gram-negativnih bakterija je tanak i visok sadržaj lipida, pa se pri tretmanu dekolorizacije lipid rastvara etanolom (ili acetonom) i povećava se propusnost ćelijskog zida, pa se da se kompleks kristalno ljubičasto-jod Lakše eluira, a nakon kontraboje kontrabojom, ćelije se boje crvenom bojom kontraboja. Princip snimanja mikroskopom: Moderni obični optički mikroskopi koriste dva sistema sočiva okulara i objektiva za uvećanje slike, pa se često nazivaju složenim mikroskopom. U optičkom sistemu mikroskopa, performanse sočiva objektiva su najkritičnije, a uvećanje uljnog sočiva je najveće, što je najvažnije za mikrobiološka istraživanja. Glavna svrha dodavanja imerzionog ulja između stakla i sočiva je povećanje svjetline osvjetljenja i povećanje rezolucije mikroskopa. Ulje se koristi umjesto zraka kao medij za prijenos svjetlosti kako bi se smanjila refrakcija ili ukupna refleksija svjetlosti i učinila posmatrana slika jasnija.
2. Eksperimentalna oprema
1. Kolonije:
Escherichia coli 24h hranljiva agar kultura,
Staphylococcus aureus oko 24-časovne nutrijentne agar kulture, Bacillus subtilis 12-18h hranljiva agar kultura.
2. Rastvori ili reagensi:
Destilovana voda, rastvor joda, rastvor za bojenje kristalno ljubičaste boje, 95 posto alkohola, rastvor za bojenje safranina, kedrovo ulje. 3. Instrument:
Mikroskop, predmetno staklo, omča za inokulaciju, alkoholna lampa, pinceta, maramica za sočiva.
3. Eksperimentalni koraci
a:
1. Razmazati
Izvadite stakalcu, zapalite stakalcu, izgorite alkohol na stakalcu i sterilizirajte ga, stavite malu kap destilovane vode u sredinu, koristite petlju za inokulaciju da nježno pokupite malu količinu bakterija na kosoj podlozi testa epruveta, Tokom čitavog procesa, otvor epruvete treba da bude iznad alkoholne lampe, a brzina treba da bude velika kako bi se sprečila kontaminacija medijuma za kulturu. Zatim kružnim pokretima razmažite male kapljice vode po stakalcu, zaustavite se kada su kapljice vode zamućene i pričekajte da se osuše i poprave.
2. Primarno bojenje
Nanesite kristalno ljubičastu boju (prikladno je da se samo prekrije bakterijski film) na koloniju, bojite 1-2 minuta, odlijte otopinu za bojenje i isperite finom vodom sa vrha stakalca dok eluat ne postane bezbojan, i stavite mrlju na stakalcu. Otresite vodu na kriške.
3. Mordant
Dodati rastvor joda kap po kap da se ispere zaostala voda, poklopiti oko 1 min i isprati vodom.
4. Dekolorizacija
Otresite vodu na toboganu, nagnite tobogan i dodajte 95 posto alkohola kako biste ga obezbojili ispod bijele pozadine, sve dok alkohol koji istječe ne postane plav, odmah isperite alkohol vodom i stavite staklo Protresite od vode na kriškama.
5. Kontrabojenje
Protivbojite otopinom safranina oko 1-2 minuta, operite vodom, a zatim osušite upijajućim papirom
6. Mikroskopski pregled:
Potražite koloniju bakterija koju treba posmatrati ispod sočiva sa malim uvećanjem (nastavite da pomerate stakalcu, ako osetite crvenu senku, odmah zaustavite, podesite uvećanje, ako nije kolonija, nastavite da pronađete), podignite cijev sočiva, a zatim prebacite na uljni retrovizor. Dodajte kap kedrovog ulja na područje uzorka i pažljivo spustite cijev sočiva pomoću grubog podešavanja tako da uljna leća bude uronjena u ulje i gotovo dodiruje uzorak. Podignite kondenzator na najvišu poziciju i potpuno otvorite otvor blende, koristite grubo podešavanje da polako podignite cijev objektiva dok se slika objekta ne pojavi u vidnom polju i koristite fino podešavanje da bude jasno i fokusirano.
